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嘔吐毒素免疫親和柱操作說(shuō)明書(shū)
【概要】
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol， DON) 又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，主要是由鐮刀菌的某些種產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性相似的有毒代謝產(chǎn)物——單端孢霉烯族化合物中的一種。廣泛存在于全球，主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物，也污染糧食制品，人和動(dòng)物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產(chǎn)生廣泛的毒性效應(yīng)。DON最明顯的毒性作用是引起嘔吐、腹瀉、腹痛等癥，并延緩生長(zhǎng)、降低免疫機(jī)能，與貧血、免疫抑制、食管癌、克山病也具有密切聯(lián)系。給人、家畜的健康造成巨大威脅。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測(cè)谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇時(shí)的樣品前處理。
柱容量：≥500ng
回收率：≥80%
【試驗(yàn)原理】
本產(chǎn)品的測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過(guò)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。
【包裝組成】
根據(jù)不同規(guī)格，每一個(gè)盒中包含5/25支脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和層析柱及1份說(shuō)明書(shū)。
【需要而未提供的設(shè)備及試劑】
設(shè)備：
┅┅高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)
┅┅粉碎機(jī)
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：?jiǎn)蔚?100μl～1000μl
┅┅槽紋濾紙（折疊快速定性或定量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾紙（1.5μm孔徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等）
試劑：
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅聚乙二醇（PEG）2000
┅┅色譜級(jí)甲醇
┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液（PBS）：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料（稀釋倍數(shù)4）
┅┅稱取25g粉碎的樣品，加入10g聚乙二醇8000后，用去離子水定容；
┅┅轉(zhuǎn)移至均質(zhì)杯中，均質(zhì)器高速均質(zhì)2分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過(guò)濾，取上清液，使用玻璃纖維濾紙過(guò)濾后待用；
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次，流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。
（二）酒類（稀釋倍數(shù)0.5）
┅┅取脫氣酒類試樣(含二氧化碳的酒類樣品使用前先置于4℃冰箱冷藏30min，過(guò)濾或超聲脫氣)或其他不含二氧化碳的
酒類試樣20g(精確到0.01g)，加人1g聚乙二醇(4.3)，用水定容至25.0mL，混勻。
┅┅用玻璃纖維濾紙過(guò)濾至濾液澄清
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次，流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。
【結(jié)果判定】
經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測(cè)，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。也可氮?dú)獯蹈珊?，?fù)溶以提升濃度（稀釋倍數(shù)相應(yīng)變化）。
【注意事項(xiàng)】
┅┅嘔吐毒素危害很大，應(yīng)戴手套操作。
┅┅不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱可于常溫保存，2-8℃儲(chǔ)存可延長(zhǎng)有效期，不可凍存
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。
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